Principes des techniques de biologie moléculaire

2e édition revue et augmentée

Denis Tagu, Christian Moussard

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  • Paru le : 01/01/2003
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La biologie moléculaire a bouleversé les sciences du vivant L'explosion de la génomique, qui propose des séquences de génomes entiers ainsi que des approches globales de leur fonctionnement, en est un exemple récent. L'objectif de cet ouvrage présenté sous forme de fiches n'est pas de détailler des protocoles ou des recettes toutes faites, mais d'expliquer simplement les principes théoriques des techniques de biologie moléculaire.
Cette édition mise à jour propose des illustrations nouvelles et présente notamment de nombreuses techniques de génomique récemment apparues dans les laboratoires. Cet ouvrage s'adresse à toute personne - spécialiste ou non - curieuse de connaître les bases des différentes techniques de manipulation des acides nucléiques.
    • Structure et expression d'un gène eucaryote codant un ARNm et une protéine
    • Paramètres de description d'un génome
    • Séquençage de génomes entiers
  • VECTEURS ET CLONAGE
    • Enzymes de restriction
    • Electrophorèse des acides nucléiques
    • Description d'un plasmide et d'un phagemide
    • Description d'un bactériophage et d'un cosmide
    • Description d'un YAC et autres grands vecteurs
    • Clonage moléculaire
    • Transformation génétique des bactéries et des levures
  • MARQUAGE D'ACIDES NUCLEIQUES ET HYBRIDATIONS
    • Marquage de l'ADN
    • Hybridation moléculaire
    • Hybridation in situ des ARNm
  • BANQUES D'ADN ET CRIBLAGE
    • Construction d'une banque d'ADN génomique
    • Construction d'une banque d'ADNc
    • Criblage d'une banque
    • Criblage différentiel : banques d'ADNc soustraites, AFLP-ADNc
    • Criblage différentiel par DD RT-PCR : tri d'ARNm (differential display RT-PCR)
    • Criblage différentiel par SSH : hybridation soustractive et suppressive (suppression substractive hybridization)
    • Criblage différentiel par RDA : analyse par différence de représentation (representational différence analysis)
    • EST : étiquettes de gènes exprimés (expressed sequence tags)
    • Réseaux d'ADN: puces à ADN, filtres d'ADNc
  • CARACTERISATION D'UN GENE
    • Séquençage d'ADN
    • PCR (polymerase chain réaction)
    • RACE : amplification rapide d'extrémités d'ADNc (rapid amplification of cDNAs ends)
    • Marche génomique par PCR
    • RT-PCR : PCR sur ARNm (reverse transcriptase PCR)
    • Transcription in vitro
    • Détermination du site d'initiation de la transcription 30
    • Analyse fonctionnelle de promoteurs
    • Gel-retard
    • Empreinte à la DNase I (footprinting) TRANSFORMATIONS GENETIQUES D'EUCARYOTES
    • Transformation génétique des végétaux par Agrobacterium tumefaciens
    • Transfert direct de gènes dans des protoplastes végétaux
    • Transfert direct de gènes par biolistique
    • Transformation génétique de cellules animales
    • Le clonage des animaux
    • Expression transitoire
  • ANALYSE DE LA FONCTION D'UN GENE
    • Protéines recombinantes
    • Les baculovirus d'insectes, vecteurs d'expression de gènes étrangers
    • Système du double hybride
    • Mutagenèse dirigée
    • Complémentation de mutation chez la Levure
    • Inactivation de gènes (knock-out)
    • Étiquetage moléculaire
    • RNAi : inactivation de gènes par interférence d'ADN (RNA interférence)
  • POLYMORPHISME D'UN GENOME
    • Marqueurs génétiques moléculaires
    • Cartes génétique et physique
    • PFGE : électrophorèse en champs pulsés (pulse field electrophoresis)
    • RFLP : polymorphisme de longueur des fragments de restriction (restriction fragment length polymorphism)
    • RAPD : polymorphisme d'ADN par amplification aléatoire (random amplified polymorphic DNA)
    • AFLP : polymorphisme de longueur de fragments amplifiés (amplified fragment length polymorphism)
    • Les rétromarqueurs
    • SSCP : polymorphisme de conformation de l'ADN monocaténaire (single strand conformation polymorphism)
    • DGGE : électrophorèse de l'ADN en gradient de gel dénaturant (denaturing gel gradient electrophoresis)
    • SNP : polymorphisme d'un seul nucléotide (single nucleotide polymorphism)
    • SSR : microsatellites, répétitions de séquences simples (simple sequence repeats)
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Denis Tagu, docteur ès sciences, est directeur de recherches à l'INRA Après avoir développé à Nancy un programme d'étude des mécanismes moléculaires de la symbiose mycorhizienne entre arbres et champignons, il a rejoint l'INRA de Rennes pour travailler à l'analyse moléculaire du développement des pucerons. Christian Moussard, docteur d'état ès sciences pharmaceutiques, est maître de conférences de biochimie et de biologie moléculaire à la faculté mixte de Médecine et de Pharmacie de l'université de Franche-Comté et praticien au Centre hospitalier universitaire de Besançon.
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